Время жизни белка
Oct. 18th, 2011 11:15 am![[personal profile]](https://www.dreamwidth.org/img/silk/identity/user.png){kind=small}
murrkaТоли я тупая и искать не умею, толи этого еще никто не проверял (что было бы очень странно учитывая популярность этого белка среди иммунологов). Где можно посмотреть время полураспада белка vav1? Или на худой конец швырните в меня протоколом как оно измеряется. Я понимаю что надо остановить трансляцию, но я уже обессилела в борьбе.
Есть у меня подозрение что он живучий, собака, и это подкладывает мне совершенно мерзкую подлянку.
ПС: судя по этим ребятам - около 30-ти часов. Блин... я как чуствовала и изначально пошла другим путем, а ревьюер хочет эндогенненько. Теперь поди объясни почему не стыкуется. Не, объяснить-то можно, но прикопаться легко!
ППС: нет, я должна выпустить пар и рассказать. Имеется два белка х и у. Х - фактор транскрипции, который по всей видимости частично регулирует экспрессию у. Чтобы сие доказать, берем SiRNA к х, запихиваем в клетку и смотрим что делается с у. Во-первых, пока Si раскачается и будет заметно что х-овая РНК пошла на убыль, проходит 48 часов. В этот момент я делаю вторую трансфекцию луциферазой под руководством промотера гена у. И получаю очень даже приличную ингибицию по сравнению с без Si. Итого, 72 часа эксперименту, а если учитывать время от посева, то 96 часов.
Теперь засада номер раз. По данным того же сайта, стабильность белка х тоже около 30-ти часов. Т.е. если в 48 часов РНК более или менее идет на убыль, то белок еще радуется жизни и провоцирует у на экспрессию. Засада номер 2. У тоже не дурак, если там какой-то х перекрыл ему транскрипцию, увижу я это только через 20-30 часов. Засада номер три: мои клетки столько не выживут, особенно с трансфекцией на ранних стадиях. Засада номер 4: 72 часа после трансфекции силенки у Si иссякают и х-овая РНК снова ползет вверх.
Есть у меня подозрение что он живучий, собака, и это подкладывает мне совершенно мерзкую подлянку.
ПС: судя по этим ребятам - около 30-ти часов. Блин... я как чуствовала и изначально пошла другим путем, а ревьюер хочет эндогенненько. Теперь поди объясни почему не стыкуется. Не, объяснить-то можно, но прикопаться легко!
ППС: нет, я должна выпустить пар и рассказать. Имеется два белка х и у. Х - фактор транскрипции, который по всей видимости частично регулирует экспрессию у. Чтобы сие доказать, берем SiRNA к х, запихиваем в клетку и смотрим что делается с у. Во-первых, пока Si раскачается и будет заметно что х-овая РНК пошла на убыль, проходит 48 часов. В этот момент я делаю вторую трансфекцию луциферазой под руководством промотера гена у. И получаю очень даже приличную ингибицию по сравнению с без Si. Итого, 72 часа эксперименту, а если учитывать время от посева, то 96 часов.
Теперь засада номер раз. По данным того же сайта, стабильность белка х тоже около 30-ти часов. Т.е. если в 48 часов РНК более или менее идет на убыль, то белок еще радуется жизни и провоцирует у на экспрессию. Засада номер 2. У тоже не дурак, если там какой-то х перекрыл ему транскрипцию, увижу я это только через 20-30 часов. Засада номер три: мои клетки столько не выживут, особенно с трансфекцией на ранних стадиях. Засада номер 4: 72 часа после трансфекции силенки у Si иссякают и х-овая РНК снова ползет вверх.