Биолухам, посоветоваться
Oct. 23rd, 2012 11:55 amЕсть у меня система основаная на люциферазе, кому неудобно люциферазу, можете заменить ее на GFP. Итак, промотер изучаемого гена, вслед за ним люцифераза. Это плазмид номер два. Плазмид номер раз - та же люцифераза, но без промотера, типа базисный уровень экспрессии, фон, от изучаемого гена не зависящий.
Итак, пихаем плазмиды (по отдельности) в клетки, и видим что люцифераза с промотером светится в 10 раз лучше чем без оного. Теперь берем клетки и что-нить с ними делаем, например активируем факторами роста. Получаем что фон теперь 4, а с промотером - 40.
Внимание вопрос: что мне со всеми этими циферками делать? С одной стороны, экспрессия выросла о-го-го. А с другой, как было в 10 раз выше фона, так и осталось. С третьей, разница между фоном и промотером без факторов роста 9, а с оными - 36.
Короче, есть у меня эффект или я уже полтора года херней страдаю?
Итак, пихаем плазмиды (по отдельности) в клетки, и видим что люцифераза с промотером светится в 10 раз лучше чем без оного. Теперь берем клетки и что-нить с ними делаем, например активируем факторами роста. Получаем что фон теперь 4, а с промотером - 40.
Внимание вопрос: что мне со всеми этими циферками делать? С одной стороны, экспрессия выросла о-го-го. А с другой, как было в 10 раз выше фона, так и осталось. С третьей, разница между фоном и промотером без факторов роста 9, а с оными - 36.
Короче, есть у меня эффект или я уже полтора года херней страдаю?